上海起發(fā)現(xiàn)貨progen PRAAV2R說明書

AAV2 Titration ELISA 2.0R

主要特征

ELISA原理：

該測定基于夾心 ELISA 技術(shù)，其中對組裝的 AAV 衣殼上的構(gòu)象表位具有特異性的重組抗體包被到板上，用于從樣本中捕獲 AAV 顆粒。

捕獲的 AAV 粒子的檢測是一個(gè)兩步過程。

1. 生物素偶聯(lián)的重組抗體與捕獲的 AAV 顆粒結(jié)合。

2. 鏈霉親和素過氧化物酶偶聯(lián)物與生物素分子反應(yīng)。添加底物會(huì)導(dǎo)致顏色反應(yīng)，該反應(yīng)與特異性結(jié)合的病毒顆粒的量成正比。

AAV 量化方法的比較：

每種常用的量化方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)：

• qPCR被廣泛使用，但存在一些問題，例如樣品制備、引物設(shè)計(jì)或 PCR 效率，這些問題會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的高度差異。

• 數(shù)字液滴 PCR方法克服了 qPCR 的一些局限性。然而，由于不同的樣品處理協(xié)議，實(shí)驗(yàn)室之間的差異仍然可能發(fā)生。

• 如果使用可靠的參考材料，斑點(diǎn)印跡是一種簡單且定量的方法。然而，它通常受到蛋白質(zhì)印跡的有限線性和動(dòng)態(tài)范圍的影響。

鑒于上述技術(shù)的實(shí)際缺點(diǎn)，傳統(tǒng)的夾心 ELISA 目前在實(shí)驗(yàn)室間和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的變化以及易用性方面似乎更勝。因此，它代表了可靠和可重復(fù)量化總 rAVV 衣殼滴度的最佳格式。

使用 shuffled/mutated AAV：

改組/突變 AAV 載體的識別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。用于 PROGEN 的 AAV ELISA 的捕獲抗體結(jié)合特定的，在某些情況下，結(jié)合明確的構(gòu)象表位。這些表位由相應(yīng) AAV 血清型的衣殼組裝產(chǎn)生。ELISA 可能識別您的改組/突變 AAV 載體的第一個(gè)跡象是抗體結(jié)合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質(zhì)序列的變化也可能影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象，因此 AAV 衣殼上呈現(xiàn)的表位的構(gòu)象。這可能會(huì)影響抗體的結(jié)合親和力，并影響基于 AAV ELISA 試劑盒提供的（非改組）試劑盒對照的滴度確定。由于這些屬性在很大程度上取決于執(zhí)行的特定改組/突變，因此 PROGEN 無法保證對改組/突變的 AAV 載體進(jìn)行成功和精確的量化。即使抗體結(jié)合表位仍然存在于您改組/突變的 AAV 衣殼上，您的檢測也需要針對您的特定 AAV 載體進(jìn)行測試和優(yōu)化。

PROGEN 強(qiáng)烈建議生產(chǎn)和校準(zhǔn)合適的（改組/突變）試劑盒對照，以確保使用 PROGEN ELISA 試劑盒對您單獨(dú)改組/突變的 AAV 載體進(jìn)行可靠的滴度測定。

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