Miltenyi磁柱選擇及標記問題

一、標記策略

用MACS進行磁分離，zui重要的參數(shù)就是高質(zhì)量的標記。對陽性細胞的標記應盡可能強，而背景要盡可能低，才能獲得對磁標記的陽性細胞和未標記的陰性細胞的分辨。有多種不同的標記策略可供參考：

1、直接標記

直接標記是zui快速和zui特異的磁標記方法。

2、間接標記

幾乎所有的單克隆抗體或多克隆抗體都可以用于間接標記。用無標記的、生物素化的或FITC、PE或APC結(jié)合的一抗標記細胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、鏈霉菌親和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分別進行磁標記。間接標記可以放大磁標記，用于分離表達比較弱的標記很有用。在間接標記中，以使用生物素化的或PE表記的一抗結(jié)果特異性。

二、磁分離柱的選擇

下表為德國Miltenyi公司的分離柱種類，其中 MS, LS, XS柱適合于正性細胞選擇，如果磁標記很強，也可用于負性選擇。Large Cell Columns與MS柱相比，孔徑較大，適合于人和動物大細胞的正性選擇，如巨核細胞。新的LD柱是為zui方便的負選設計，代替了AS 和BS柱。LD 柱和CD及D柱即使在磁標記很弱的情況下也能獲得zui高的負選效率。µ 和M柱是為分子生物學方面的應用而設計的。

三、分選策略

分選策略也要根據(jù)實際情況進行選擇

1、正性選擇（positive selection）

磁珠對細胞功能和活力的影響很小，因此一般首先應該考慮正選策略。正選具有速度快和單克隆抗體的特異性優(yōu)勢，大多數(shù)情況下，正選省時省錢。

2、負性選擇（negative selection）

如果正選策略不適合您的實驗，比如有可能因抗體結(jié)合引起細胞活化或沒有針對靶細胞的特異性抗體，可以選擇負選策略。MACS

附：Miltenyi分離柱技術(shù)指標及圖片