Receptor Ligand Technologies GmbH代理

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描述: 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ECGF）是一種從牛大腦中提取出來(lái)的，含有能夠促進(jìn)哺乳動(dòng)物血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的因子。 也有報(bào)道稱ECGF對(duì)用于單克隆抗體生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞的融合和生長(zhǎng)有一定的輔助作用。制備內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的方法是根據(jù)Maciag等的方法（1979）修改過(guò)的，是從含有氯化鈉和硫酸鏈霉素的溶液中無(wú)菌凍干而來(lái)的。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）可以用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行原代培養(yǎng)。這些細(xì)胞的持續(xù)增殖已被證明是非常困難的。牛腦中的提取物可以保證這些細(xì)胞的長(zhǎng)期體外增殖。在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中加入纖維連接蛋白或膠原基質(zhì)可以培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。當(dāng)加入ECGF后，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入胎牛血清的量可以減少。肝素可以提高ECGF有絲分裂的活性。 有報(bào)道稱在培養(yǎng)雜交瘤和其他類型的細(xì)胞時(shí)，加入ECGF后可以不用加入飼養(yǎng)層細(xì)胞。 
宿主: 牛
純化: 粗提物
緩沖液: H₂O, w/o 防腐劑
形式: 凍干粉 
使用說(shuō)明:內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子是經(jīng)過(guò)無(wú)菌凍干的，每小瓶含6毫克蛋白。原液的配制：用2毫升預(yù)熱（37℃）的滅菌平衡鹽溶液溶解蛋白，溫和旋轉(zhuǎn)小瓶使干粉溶解。原液可進(jìn)一步用無(wú)菌組織培養(yǎng)液稀釋到所需的工作濃度。雖然原液可加入無(wú)菌組織培養(yǎng)液中，建議將稀釋的蛋白無(wú)菌過(guò)濾后使用。6毫克ECGF可以加入 500毫升的培養(yǎng)基中。 
生物活性/工作濃度: 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），ECGFzui適宜的工作濃度是50-200 μg/ml。 加入50 μg/ml肝素后，ECGFzui適宜濃度是10 μg/ml. 作為制備單克隆抗體的輔助生長(zhǎng)因子，ECGF的zui適宜濃度是25- 100 μg/ml. 
種屬的特異性: 牛ECGF 可以作用于牛，鼠和人的細(xì)胞。 
保存條件：
溶解之前保存 2-8 °C。 溶解之后，溶液保存在 –20 °C。
推薦將溶解后溶液保存在 -20°C。避免反復(fù)凍融。 
使用: 牛ECGF 只用于科研，不能應(yīng)用于臨床! 
產(chǎn)品編號(hào): 300-090-5 規(guī)格: 5x 6 mg 
參考文獻(xiàn): [Maciag T (1982) JBC 257:5333; Olander J (1980) In Vitro 6:209; Folkman J (1980) Nature 288:551; Evans CH (1982) JNCI 68:127; Pintus C (1983) J Immuno Meth 61:195; Maciag T (1979) PNAS 6:5674; Thornton SC (1983) Science 222:623; Ransom JH (1986) Methods Enzymol 121:293]
ECGF 用于HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)

ECGF用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的zui適濃度范圍是100-300 μg/ml，加入肝素(50 μg/ml)后的zui適濃度范圍是10-20 μg/ml。作為一種生長(zhǎng)添加物用于單克隆抗體的生產(chǎn)，zui適濃度范圍是25-100 μg/ml。牛和豬ECGF因子對(duì)小鼠細(xì)胞，牛細(xì)胞和人細(xì)胞起作用。

Protocol:
- 每孔中生長(zhǎng)培養(yǎng)基(EGM)中的細(xì)胞濃度是5-7 x 10³ cells
- 隔天培養(yǎng)細(xì)胞[如果實(shí)驗(yàn)很急,可以將早上培養(yǎng)的細(xì)胞下午進(jìn)行換液。將生長(zhǎng)培養(yǎng)基換成基礎(chǔ)培養(yǎng)基（EBM）]
- 將生長(zhǎng)培養(yǎng)基換成基礎(chǔ)培養(yǎng)基(HUVEC: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +1-2% 胎牛血清)
- 培養(yǎng)24h
- 再次換液，加入因子 (生長(zhǎng)因子，抑制劑，等等)
- 培養(yǎng)18h
- 加入10u l 3H-胸腺嘧啶溶液[0.025mCi/ml]/孔 (=0.25u Ci)
- 37°C再培養(yǎng)6h
- 洗滌步驟：(250ul/孔)
       PBS        一次
       MeOH     兩次，每次5min
       TCA        兩次，每次10min
       H₂O        一次
- 每孔加入250 ul 0.3M NaOH，裂解細(xì)胞
- 將2.5 ml ECO加入到相應(yīng)的閃爍計(jì)數(shù)瓶中
- 將細(xì)胞裂解液加入的閃爍計(jì)數(shù)瓶中
- 用閃爍液體計(jì)數(shù)（-計(jì)數(shù)器;貝克曼儀器公司） 

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